人間充質(zhì)干細胞成軟骨分化試劑盒AC-1001028

人間充質(zhì)干細胞成軟骨分化試劑盒

產(chǎn)品基本信息

產(chǎn)品簡介

人間充質(zhì)干細胞成軟骨分化試劑盒是埃澤思生物（Applied Cell^?）自主研發(fā)的一款用于人類間充質(zhì)干細胞分化成軟骨產(chǎn)品，可用于骨髓、臍帶、脂肪等組織來源的間充質(zhì)干細胞的誘導成軟骨分化。

產(chǎn)品特性

l 誘導分化程序簡單便捷。

l 誘導成軟骨細胞效率高。

產(chǎn)品內(nèi)容

操作方法

1. 相關材料

? Xeno-Free人間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基（Applied Cell^?:AC-1001003）

? 人間充質(zhì)干細胞成軟骨分化試劑盒（Applied Cell^?:AC-1001028）

? 成軟骨檢測染液（Applied Cell^?:AC-1001023）

? Xeno-Free細胞消化液（Applied Cell^?:AC-1001024/1001025）

? 磷酸鹽緩沖液(1×PBS) （Applied Cell^?: Cat.AC-1001037）

2. 實驗準備

人間充質(zhì)干細胞成軟骨分化培養(yǎng)基的配制：

2.1 在2-8℃解凍人間充質(zhì)干細胞成軟骨分化添加劑，輕晃搖勻；

2.2 將添加劑加入到人間充質(zhì)干細胞成軟骨分化基礎培養(yǎng)基中（添加劑10mL與90mL基礎培養(yǎng)基徹底混合）混勻，即為人類間充質(zhì)干細胞成軟骨分化培養(yǎng)基。人間充質(zhì)干細胞成軟骨分化培養(yǎng)基可在2-8℃穩(wěn)定儲存2-3周。

注意：人間充質(zhì)干細胞成軟骨分化添加劑只能在2-8℃解凍，待添加劑加入到培養(yǎng)基以后，請用培養(yǎng)基潤洗添加劑試管1-2次，因添加劑量較少可防止添加劑粘附在試管壁上造成損失。

3. 實驗操作

3.1誘導成軟骨球

3.1.1 誘導成軟骨分化實驗之前，用Xeno-Free細胞消化液消化后計數(shù)；

3.1.2 分配0.5 mL細胞懸液（2-3×10⁵個細胞）到15mL或50mL離心管中，300×g，離心5min；

3.1.3 吸掉上清，用2-5mL人間充質(zhì)干細胞成軟骨分化培養(yǎng)基重懸沉淀。

3.1.4 離心后擰松離心管蓋便于氣體交換，置于37℃，5%CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第2天，細胞團應在離心管底部呈球形的團狀；

注意：離心后不需要吸掉上清液，且不要隨意晃動離心管。

3.1.5 自接種時間開始計算，每天更換人間充質(zhì)干細胞成軟骨分化培養(yǎng)基；

注意：每次換液時，輕輕的搖動離心管或輕彈離心管底部確保細胞球沒有粘附到管壁上。第4-5天即會看到非常明顯軟骨球。

3.1.6 15-21天，軟骨球停止生長，收獲軟骨球：吸掉人間充質(zhì)干細胞成軟骨分化培養(yǎng)基，用PBS洗1次。

3.2 成軟骨檢測染液染色

3.2.1 清洗：軟骨球用PBS清洗2次；

3.2.2 固定：加2mL細胞固定液，固定30min，水洗2次；

3.2.3 染色：成軟骨檢測染液（Applied Cell:AC-1001023）染色5min；

3.2.4 洗滌：dH2O洗去多余的染料，軟骨球呈深藍色。

切片染色：

3.2.1、復水：將誘導分化的軟骨球切片浸泡在100% (vol/vol) 乙醇中2 × 5 min， 95% (vol/vol) 乙醇中 1 × 2min，70% (vol/vol)乙醇中1 × 2 min；

3.2.2、用流動的水沖洗30s；

3.2.3、成軟骨染料染色5min；

3.2.4、用dH₂O洗去多余的染料；

3.2.5、脫水：浸泡在95% (vol/vol) 乙醇中2×5min，在100% (vol/vol) 乙醇中2×5min;

3.2.6、用二甲苯清洗3 × 2 min；

3.2.7、用中性樹膠封片，用顯微鏡觀察并拍照。

4.誘導成軟骨效果圖