微囊藻毒素檢測(cè)試劑盒

 微囊藻毒素檢測(cè)試劑盒
適用
北京普華仁生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司提供的微囊藻毒素檢測(cè)試劑盒適用于水中微囊藻毒素的定量檢測(cè)。

檢測(cè)原理
微囊藻毒素檢測(cè)試劑盒由可以和微囊藻毒素及微囊藻毒素酶標(biāo)記物結(jié)合的多克隆抗體制成。樣品中的微囊藻毒素與微囊藻毒素酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合數(shù)量有限的抗體結(jié)點(diǎn)。
檢測(cè)過(guò)程中， 先加入微囊改造毒素酶標(biāo)記物及含有微囊藻毒素的樣品到測(cè)試孔中接著加入抗體，酶標(biāo)記物與樣品中的微囊藻毒素競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合同樣的抗體的結(jié)合點(diǎn)。測(cè)試孔中包被有抗兔IgG，用于捕獲加入的兔抗微囊藻毒素抗體。
孵育30分鐘后洗掉小孔中所有沒(méi)有結(jié)合的分子。每孔中加入干凈的底物溶液，連接的酶結(jié)合物可以將底物轉(zhuǎn)化成藍(lán)色化合物，一個(gè)酶分子可以轉(zhuǎn)化多個(gè)底物分子。
由于各個(gè)孔中抗體可結(jié)合位點(diǎn)是相同的，并且加入的微囊藻毒素酶標(biāo)記物的量也是相同的，樣品中微囊藻毒素含量低的則酶標(biāo)記物結(jié)合得多，顏色會(huì)顯深藍(lán)色。反之，樣品中微囊藻毒素含量高的則酶標(biāo)記物結(jié)合得少，顏色會(huì)顯淺藍(lán)色。
注意：顏色與微囊藻毒素的含量成反比。
較深的顏色=較低的濃度
較淺的顏色=較高的濃度

特性：
特異性
Beacon微囊藻毒素檢測(cè)試劑盒沒(méi)有區(qū)分微囊藻毒素-LR(作為標(biāo)準(zhǔn)品)及其它類型，然而可以測(cè)到微囊藻毒素的其它類型，以下表格中展示的是相關(guān)值及交叉反映率（%CR），以下所有濃度均為ppb級(jí)。
種類 %CR
微囊藻毒素-LR 100
微囊藻毒素-RR 87
微囊藻毒素-YR 48
節(jié)球藻毒素 31

試劑盒組成
?包被有羊抗兔抗體的的微孔板 （12×8條）。
?陰性對(duì)照品一瓶（0ppb微囊藻毒素-LR）。
?0.1ppb、0.3ppb、0.8ppb、2ppb微囊藻毒素-LR標(biāo)準(zhǔn)品各一瓶。
?1.0ppb微囊藻毒素質(zhì)控樣品一瓶。
?微囊藻毒素HRP酶標(biāo)記物一瓶。
?兔抗微囊藻毒素抗體溶液一瓶。
?底物一瓶。
?停止液一瓶。（注意！1N 鹽酸，小心處理）
?100×清洗液。

注意事項(xiàng)
1.不用時(shí)請(qǐng)將試劑盒儲(chǔ)存于4-8℃。
2.不可冷凍試劑盒，不可使其暴露在大于37℃環(huán)境中。
3.開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前，所有試劑達(dá)到室溫。
4.不可使用過(guò)期試劑。
5.不同批次的試劑不可混用。
6.使用確證方法確認(rèn)陽(yáng)性樣品。

需要的試劑和材料
1.酶標(biāo)儀
2.薄膜
3.計(jì)時(shí)器或表
4.蒸餾水或去離子水
5.振蕩器

檢測(cè)程序
1.將所有試劑及樣品置于室溫下。
2.從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。
3.稀釋100倍濃縮清洗液為1倍清洗液，例：取5ml 100倍清洗液到500ml洗瓶中并加入495ml蒸餾水。
4.吸取50ul酶標(biāo)記物到微孔板的每個(gè)孔中。
5.吸取50ul標(biāo)準(zhǔn)，陰性對(duì)照，樣品到對(duì)應(yīng)微孔中，必須保證每種溶液使用干凈的吸頭吸取，避免交叉污染。
6.加入50ul抗體溶液到每個(gè)小孔中。
7.快速震蕩使孔中的溶液混合，并敷上薄膜，或者微孔板可以放在振蕩器上震蕩孵育，從而達(dá)到在孵育期間持續(xù)震蕩的效果。
8.孵育30分鐘。
9.孵育完后，去掉封口膜將微孔中的溶液倒入水槽中，用1倍清洗液清洗完全充滿微孔，震蕩后倒掉，重復(fù)四次，總共五次洗板。在吸水紙上拍打，盡可能將水拍干。
10.每個(gè)微孔中加入100ul底物溶液。
11.蓋上小孔并孵育30分鐘。
12.按照加底物的順序每孔中加入100ul停止液。停止液為1 N鹽酸，需小心操作。
13.450nm下讀板，如果酶標(biāo)儀有雙波長(zhǎng)，可同時(shí)測(cè)605或650nm雙波長(zhǎng)。
14.如果酶標(biāo)儀可以處理數(shù)據(jù)，可用半對(duì)數(shù)線性或4參數(shù)曲線擬合，如果為手動(dòng)計(jì)算，則可按照以下部分進(jìn)行。

計(jì)算結(jié)果
1.讀板之后，求標(biāo)準(zhǔn)，陰性對(duì)照，樣品的平均吸光度值并按以下方法計(jì)算%B0:
標(biāo)準(zhǔn)，陰性對(duì)照，樣品吸光度值的平均值
%B0 = --------------------------------------------------------
陰性對(duì)照的平均吸光值
2.以%B0為Y軸，以微囊藻毒素標(biāo)準(zhǔn)濃度的半對(duì)數(shù)值為X軸，繪制曲線。
3.通過(guò)每個(gè)樣品的B0%，在圖上計(jì)算出微囊藻毒素的濃度。
4.如果樣品B0%在設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)B0%范圍之內(nèi)，就可以得出一個(gè)具體的濃度值。如果樣品B0%出了范圍只能說(shuō)明樣品的濃度大于高濃度的標(biāo)準(zhǔn)或低于低濃度的標(biāo)準(zhǔn)。

質(zhì)量控制
1．1.0ppb質(zhì)控樣的%B0值應(yīng)該處于下面的范圍之內(nèi)：
1.0 ppb Microcystin control              0.80-1.30ppb
2．樣品計(jì)算
物質(zhì) 吸光度值 平均吸光度值   ±SD** %RSD %B0 濃度(ppb)
陰性對(duì)照 1.478
1.552 1.515±0.052 3.4 100 N/A
0.1 1.255
1.194 1.225±0.043 3.5 80.8 N/A
0.3 0.941
0.932 0.937±0.006 0.68 61.8 N/A
0.8 0.626
0.602 0.614±0.017 2.7 40.5 N/A
2.0 0.389
0.386 0.302±0.008 0.54 25.6 N/A
樣品 0.610
0.634 0.622±0.017 2.7 31.5 0.909

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質(zhì)量保證，歡迎索取詳細(xì)資料，咨詢洽談。

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