黃曲霉毒素M1 ELISA檢測(cè)試劑盒

黃曲霉毒素(Aflatoxin, AF）是由多種霉菌代謝的毒性產(chǎn)物，例如Asperillus flavus 和Asperillus parasiticus霉菌。他們具有致癌性，存在與谷物、堅(jiān)果、棉籽和其他人類商品食物中或動(dòng)物飼料中。谷物可能被黃曲霉毒素的衍生物：B1、B2、G1和G2其中一種污染或者被多種毒素污染。AFB1是目前檢測(cè)到的最毒的毒素。其他類型毒素如果污染的濃度很高也存在很大的危險(xiǎn)。黃曲霉毒素能夠引發(fā)人類很多病癥包括肝癌、黃曲霉中毒、萊耶綜合癥和慢性肝炎。動(dòng)物容易攝取到黃曲霉毒素，原因是動(dòng)物吃的飼料在生長(zhǎng)、收割和貯存過程中能被黃曲霉毒素產(chǎn)生的真菌毒素污染。當(dāng)奶牛吃了被污染的飼料，AFB1在體內(nèi)羥基化轉(zhuǎn)化成AFM1，AFM1常在牛乳中被檢測(cè)到。如果牛初乳中存在AFM1，針對(duì)一般的牛奶處理方法例如巴氏殺菌，但AFM1是非常穩(wěn)定的，它可能一直留存到人類最終消費(fèi)產(chǎn)品中。世界上大多數(shù)國(guó)家的政府已經(jīng)對(duì)人類和動(dòng)物性食品中制定了嚴(yán)格的黃曲霉毒素限量標(biāo)準(zhǔn)。很多國(guó)家已經(jīng)聲明降低牛奶和奶制品中的AFM1限量標(biāo)準(zhǔn)。歐盟已經(jīng)將牛奶和奶制品中AFM1的限量定為0.05ug/L或者50ppt。

HELICA AFM1 分析測(cè)定試劑盒目的是用來定量檢測(cè)牛奶、奶粉和乳酪中的AFM1。

HELICA AFM1 分析測(cè)定是一種固相競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析測(cè)定方法。聚苯乙烯微孔板中包被抗AFM1的高親和力抗體。將標(biāo)準(zhǔn)品或者樣品加入合適的微孔中，如果存在AFM1，它將和包被的抗體結(jié)合。接下來，加入HRP（辣根過氧化物酶）標(biāo)記的毒素，標(biāo)記毒素與標(biāo)準(zhǔn)品或者樣品與抗體沒有結(jié)合的部位相結(jié)合。孵育一段時(shí)間后，倒出孔里的液體，清洗后加入顯色底物，在酶的作用下孔里將會(huì)出現(xiàn)藍(lán)色。顯色顏色的深淺與結(jié)合物的量成正比例的關(guān)系，與標(biāo)準(zhǔn)品或樣品中AFM1的量成反比例關(guān)系。所以，標(biāo)準(zhǔn)品或樣品中的AFM1濃度越高，顯色的藍(lán)色將會(huì)越淺。加入酸，終止反應(yīng)，底物顏色由藍(lán)色變?yōu)樽攸S色。微孔板放進(jìn)酶標(biāo)儀里，在OD_450nm 讀取吸光度值。樣品的吸光度值與試劑盒中標(biāo)準(zhǔn)OD值相比較，相對(duì)應(yīng)得出結(jié)果。

1、使用前將試劑拿到室溫。

2、將裝試劑的小袋開封，根據(jù)待測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的數(shù)量取出一定量的微孔。

3、將不使用的微孔重新放入小袋，封好口避免潮濕的空氣進(jìn)入。（分析檢測(cè)完畢微孔支架將來可以繼續(xù)使用。）

4、每次都要使用新吸頭，吸取200μL 標(biāo)準(zhǔn)品或樣品加到兩個(gè)復(fù)孔里。

5、將板子裝入袋子中封口，避免水蒸氣揮發(fā)和紫外光的照射。

6、在室溫（19℃-25℃）下孵育2h。

7、將孔里的液體倒入合適的容器中，從洗瓶里吸取PBST洗板或用多道洗板洗孔，然后迅速棄掉洗液到合適的容器中，重復(fù)洗3次。在一層厚的吸水紙上拍板，去掉殘留的洗液。

8、每個(gè)孔中加入100μL的偶聯(lián)物（綠色蓋子）。

9、再次用袋子封好板子，室溫下孵育15min。

10、重復(fù)步驟7。

11、每個(gè)孔中加入100μL 酶反應(yīng)底物（TMB）孵育15-20min。

12、加入100μL的終止液終止反應(yīng)，板中顏色將會(huì)由藍(lán)色變?yōu)樽攸S色。

13、450nm 下讀取每個(gè)孔的吸光度值（OD），使用一個(gè)空白對(duì)照或者使用不同的630nm下濾光片。

第一次孵育標(biāo)準(zhǔn)品和樣品階段，可以在4℃-6℃過夜，顯著的改善樣品為5ppt和更大濃度時(shí)0濃度抑制結(jié)合率。如果選擇這個(gè)步驟，接下來偶聯(lián)物和TMB的孵育可以在室溫下進(jìn)行。

檢測(cè)極限規(guī)定為2ppt（ng/L）, 2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)偏差低于0濃度檢測(cè)結(jié)果的平均OD值(n=18, CV<2%)。

使用原有的OD值或?qū)嶒?yàn)獲得的OD值與標(biāo)準(zhǔn)曲線中AFM1濃度為0時(shí)OD值的百分比值建立劑量效應(yīng)曲線。通過在標(biāo)準(zhǔn)品曲線中添加新數(shù)值計(jì)算被測(cè)物質(zhì)中AFM1的濃度。

標(biāo)準(zhǔn)品和樣品獲得的平均吸光度值除以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為0時(shí)的吸光度值乘以100，標(biāo)準(zhǔn)品濃度為0時(shí)為100%，其他標(biāo)準(zhǔn)品和樣品吸光度值都以這樣的形式表示。

標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)值輸入到坐標(biāo)圖的坐標(biāo)系統(tǒng)中，計(jì)算AFM1的濃度ng/L。根據(jù)相應(yīng)的吸光度值每個(gè)樣品都能從坐標(biāo)曲線中讀出AFM1的濃度含量ng/L。

為了獲得樣品中AFM1的精確含量ng/L數(shù)據(jù)，從標(biāo)準(zhǔn)曲線讀取的濃度應(yīng)該乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。牛奶樣品乘以1，乳酪樣品乘以5。