概述
活菌細(xì)胞濃度測量在發(fā)酵過程中具有非常重要的作用。通過它可以了解生物反應(yīng)器中菌體或細(xì)胞生長狀況,也可以了解一些描述菌體或細(xì)胞生長或生產(chǎn)能力的間接參數(shù),如比生產(chǎn)速率,比基質(zhì)消耗速率,細(xì)胞代謝流衡算等。
然而由于活細(xì)胞濃度傳感技術(shù)的困難,傳統(tǒng)的測量方法還是通過手工取樣測量。操作復(fù)雜,滯后時間長。尤其是在解決區(qū)分培養(yǎng)基顆粒,微載體,絲狀菌濃度檢測等問題上都有局限性。
活菌細(xì)胞濃度測量在發(fā)酵過程中具有非常重要的作用。通過它可以了解生物反應(yīng)器中菌體或細(xì)胞生長狀況,也可以了解一些描述菌體或細(xì)胞生長或生產(chǎn)能力的間接參數(shù),如比生產(chǎn)速率,比基質(zhì)消耗速率,細(xì)胞代謝流衡算等。
然而由于活細(xì)胞濃度傳感技術(shù)的困難,傳統(tǒng)的測量方法還是通過手工取樣測量。操作復(fù)雜,滯后時間長。尤其是在解決區(qū)分培養(yǎng)基顆粒,微載體,絲狀菌濃度檢測等問題上都有局限性。
ABER原位活細(xì)胞在線檢測儀的基本功能與應(yīng)用
功能: ABER能實(shí)時在線檢測發(fā)酵罐內(nèi)活細(xì)胞的濃度,密度,干重,生物量體積,電容大小,導(dǎo)電率大小;而不受細(xì)胞碎片,細(xì)胞團(tuán)塊,死細(xì)胞,發(fā)酵液泡沫,微載體顆粒等影響。
適用范圍:動植物細(xì)胞,酵母,細(xì)菌藻類等種類的研究和生產(chǎn)質(zhì)量控制。
認(rèn)證: 廣泛適用于發(fā)酵生產(chǎn)工藝中的質(zhì)量控制。符合ISO,F(xiàn)DA,cGMP等認(rèn)證。
功能: ABER能實(shí)時在線檢測發(fā)酵罐內(nèi)活細(xì)胞的濃度,密度,干重,生物量體積,電容大小,導(dǎo)電率大小;而不受細(xì)胞碎片,細(xì)胞團(tuán)塊,死細(xì)胞,發(fā)酵液泡沫,微載體顆粒等影響。
適用范圍:動植物細(xì)胞,酵母,細(xì)菌藻類等種類的研究和生產(chǎn)質(zhì)量控制。
認(rèn)證: 廣泛適用于發(fā)酵生產(chǎn)工藝中的質(zhì)量控制。符合ISO,F(xiàn)DA,cGMP等認(rèn)證。
原理——雙電極電容法
1987年Kell首先描述了測量細(xì)胞量的雙電極性質(zhì)。生物量測量是采用圖中所示的4個鉑金電極,外面兩個外電極產(chǎn)生一個交變的電場,兩個內(nèi)電極測量電壓。在緩沖液環(huán)境中,兩個外電極間使溶液內(nèi)的離子向相反方向移動形成溶液的電導(dǎo)率。
活細(xì)胞細(xì)胞膜完整,在電場中被極化而形成電容。而這個電容值會被ABER 準(zhǔn)確檢測出來,用已標(biāo)志生物量(BIOMASS)不同的細(xì)胞種類會有不同的電容值。其大小和細(xì)胞的體積也呈一定比例。而死細(xì)胞(膜破裂),氣泡或是細(xì)胞碎片因不能形成一個電容,所以ABER將不會將其檢測到。
ABER的探頭由FDA所認(rèn)證的材料316L鋼所構(gòu)成,保證其精度和耐用度??山?jīng)受原位蒸汽滅菌。
ABER的應(yīng)用的實(shí)例:
一 微載體培養(yǎng)培養(yǎng)監(jiān)測:傳統(tǒng)方法對通過微載體來培養(yǎng)的動物細(xì)胞計(jì)數(shù)相當(dāng)困難。需要離線取樣再計(jì)數(shù)細(xì)胞核,但是卻沒有辦法對其中活細(xì)胞的數(shù)目作出準(zhǔn)確判斷;由于載體材料是均一的,不能形成電容。ABER能夠檢測出微載體中活細(xì)胞的數(shù)目,而且不受微載體顆粒的影響。
二 絲狀菌生長狀態(tài)監(jiān)測:絲狀菌發(fā)酵(如抗生素生產(chǎn))中容易產(chǎn)生絲狀菌結(jié)團(tuán)、結(jié)球,沒有明顯的細(xì)胞界限。傳統(tǒng)的方法(如濁度法,染色法)會產(chǎn)生很大的誤差。在評估菌生長情況或放大罐移種菌量時只能通過“經(jīng)驗(yàn)”來判斷;ABER能夠準(zhǔn)確測量出絲狀菌包括團(tuán)塊中的生物量,避免由于經(jīng)驗(yàn)不足造成產(chǎn)量下降。
三 監(jiān)測發(fā)酵一致性,方便做發(fā)酵放大研究:ABER220系列可以配上多個探頭,同時監(jiān)測多個發(fā)酵罐發(fā)酵情況。結(jié)合各種檢測參數(shù),了解菌體或細(xì)胞的生長情況以判斷“收割”最佳時間。
四 監(jiān)測在線發(fā)酵過程,方便做發(fā)酵過程優(yōu)化研究與生產(chǎn)控制:對灌注發(fā)酵罐中細(xì)胞的濃度進(jìn)行監(jiān)控,指導(dǎo)細(xì)胞返罐量和地物流加速率可促進(jìn)重組蛋白生產(chǎn)自動化,并提高產(chǎn)量及降低純化難度;同時結(jié)合其他檢測參數(shù)也可以更加容易判斷染菌,菌絲體“自溶”等現(xiàn)象。
關(guān)于英國ABER
英國Aber-instruments是上世紀(jì)80年代基于電容法開發(fā)出活細(xì)胞濃度在線分析儀,Aber活細(xì)胞濃度在線分析儀解決了微生物發(fā)酵過程和動植物培養(yǎng)過程中實(shí)時在線生物量的檢測問題,在隨后20多年的時間里一直是行業(yè)的領(lǐng)導(dǎo)者。